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■ 制品內(nèi)容 (Code No.: RR064A: 50 μl反應×100次) |
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2X One Step RT-PCR Buffer Ⅲ*1840 μl × 3 支TaKaRa Ex Taq HS (5 U/ μl)100 μlPrimeScript RT Enzyme Mix Ⅱ*2100 μlRNase Free dH2O1.25 m l × 2 支ROX Reference Dye (50X)*3100 μlROX Reference Dye II (50X)*3100 μl *1 內(nèi)含dNTP Mixture,Mg2+等。*2 內(nèi)含RNase Inhibitor。*3 用以校正孔與孔之間產(chǎn)生的熒光信號誤差。Applied Biosystems 7300 Real-Time PCR System使用ROX Reference Dye(50X),7500 Real-Time PCR System使用ROX Reference Dye II(50X),Thermal Cycler Dice Real Time System和Smart Cycler System、LightCycler等Real Time PCR擴增儀不必使用。 |
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■ 制品說明 |
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本制品是采用探針法進行Real Time One Step RT-PCR的專用試劑。使用本制品進行Real Time RT-PCR反應可在同一反應管內(nèi)連續(xù)進行,操作簡單,并能有效防止污染。本反應體系由于可以對擴增產(chǎn)物進行實時監(jiān)測,大大提高了檢測靈敏度,并省略了PCR反應后的電泳步驟,非常適合于RNA病毒等微量RNA的檢測。本制品中使用了適合于Real Time RT-PCR的反轉(zhuǎn)錄酶PrimeScript RTase和具有高擴增效率和高擴增特異性的TaKaRa Ex Taq HS,能進行穩(wěn)定高效的Real Time One Step RT-PCR反應。 ■ 保存-20℃。 ■ 試劑盒特長1. 通過Real Time One Step RT-PCR反應,可以快速、準確地對RNA病毒等微量RNA 進行分析。2. PCR用DNA聚合酶使用了TaKaRa Ex Taq HS,可以進行Hot Start法PCR 反應,再與Takara特別開發(fā)的Buffer系統(tǒng)相結(jié)合,具有高擴增效率,高擴增靈敏度,高擴增特異性之特點。3. One Step RT-PCR Buffer III是一種2X濃度的Premix Type試劑,操作簡單,能有效避免污染。 ■ 使用注意1. 當同時需要進行數(shù)次Real Time One Step RT-PCR反應時,應先配制各種試劑的混合液 (Master Mix;其中包括RNase Free dH2O、Buffer、各種酶等),然后再分裝到每個反應管中。這樣,可使所取的試劑體積更準確,減少試劑損失,避免重復分取同一試劑。同時也可以減少實驗操作或?qū)嶒灅悠分g產(chǎn)生的誤差。2. 使用TaKaRa Ex Taq HS、PrimeScript RT Enzyme Mix Ⅱ時,應輕輕混勻,避免起泡;分取之前要小心地離心收集到反應管底部;由于酶保存液中含有50%的甘油,粘度高,分取時應慢慢吸取。3. 2X One Step RT-PCR Buffer Ⅲ 融解后如有不溶物請充分混合。配制Real Time One Step RT-PCR反應液時應避免強光照射。4. 反應液的配制、分裝請一定使用新的 (無污染的) 槍頭、Microtube等,盡量避免污染。5. 本制品只能使用特異性反轉(zhuǎn)錄引物,不能使用Random Primer 和Oligo dT Primer 等進行反轉(zhuǎn)錄反應。 |
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