- 品名： TaKaRa RNA2步法反轉錄PCR擴增試劑盒（AMV)
- 品牌： TaKaRa
- 型號： RR019B
- 產品詳情
- 規(guī)格參數(shù)
商品名稱：TaKaRa RNA PCR Kit (AMV) Ver.3.0
商品編號：SPU2021050498
上架時間：2022-01-06
| ■ 制品內容 (Code No.: RR019A : 100 次量*1) |
| AMV Reverse Transcriptase XL (5 U/μl) (Avian Myeloblastosis Virus來源)50 μlRNase Inhibitor (40 U/μl)25 μlRandom 9 mers*2 (50 pmol/μl)50 μlOligo dT-Adaptor Primer (2.5 pmol/μl)50 μlRNase Free dH2O1 mlTaKaRa Ex Taq HS (5 U/μl)25 μlM13 Primer M4*2 (20 pmol/μl)50 μl10 × RT Buffer [100 mM Tris-HCl (pH8.3)，500 mM KCl]1 ml5 × PCR Buffer1 mldNTP Mixture (各10 mM)150 μlMgCl2 (25 mM)1 mlControl R-1 Primer*2 (20 pmol/μl) (Positive Control RNA下游引物)25 μlControl F-1 Primer*2 (20 pmol/μl) (Positive Control RNA上游引物)25 μlPositive Control RNA*3 (2 × 105 copies/μl)(Transcribed poly(A)+ RNA of pSPTet3 plasmid)25 μl *1：1次反應即10 μl RT及 50 μl PCR*2：引物序列引物名稱各引物序列Random 9 mers 5′-(P)NNNNNNNNN-3′Oligo dT-Adaptor Primer 包含dT區(qū)域及M13 Primer M4序列。Control F-1 Primer 5′-CTGCTCGCTTCGCTACTTGGA-3′Control R-1 Primer 5′-CGGCACCTGTCCTACGAGTTG-3′M13 Primer M4 5′-GTTTTCCCAGTCACGAC-3′*3：Positive Control RNA本試劑盒中的Control RNA是以pSPTet3質粒 (質粒中的SP6啟動子下游插入長約1.4 kb的pBR322來源的DNA片段，其DNA片段上含有抗四環(huán)素基因) 為模板由SP6 RNA聚合酶經體外轉錄而得到的。Control RNA (約1.4 kb) 是帶有30個A堿基的具有Poly(A)+ 尾的RNA。當把Control RNA經RT-PCR合成的雙鏈cDNA插入質粒時，該質粒便可獲得四環(huán)素抗性。Control RNA簡圖見圖1。圖1. Positive Control RNA：使用各種引物所能擴增的DNA片段 |
| ■ 制品說明 |
| PCR (Polymerase Chain Reaction；聚合酶鏈式反應) 是一種體外擴增DNA的簡單而有效的方法。雖然原理上PCR法是擴增DNA，RNA不能直接被擴增，但是經過反轉錄酶的作用把RNA反轉錄成cDNA后，PCR法便可應用于RNA的解析了。目前，此方法已廣泛應用于RNA的構造解析、cDNA的克隆及RNA水平上的表達解析等多種領域。TaKaRa RNA PCR Kit Ver.3.0是使用AMV (Avian Myeloblastosis Virus) 由來的反轉錄酶將RNA合成cDNA，然后在同一反應管中使用Hot Start PCR用TaKaRa Ex Taq HS DNA聚合酶擴增此cDNA的RT-PCR試劑盒。本試劑盒含有從RNA到cDNA，然后使用PCR法擴增此cDNA所需的全部試劑，可實現(xiàn)簡單高效的RNA分析。本試劑盒中的Oligo dT-Adaptor Primer的特殊設計，大大地提高了Poly(A)+ RNA 3′端區(qū)域的cDNA合成效率。Hot Start PCR用DNA聚合酶TaKaRa Ex Taq HS的應用，避免擴增前由于錯配或引物二聚體產生的非特異性擴增。 ■ 保存 |
| -20℃。 |
| ■ RNA LA PCR的原理 |
| 本試劑盒使用AMV由來的反轉錄酶由RNA合成cDNA，并可在同一反應管中使用TaKaRa Ex Taq HS擴增此cDNA。Random 9 mers、Oligo dT-Adaptor Primer或特異性下游引物等均可作為反轉錄引物用于cDNA合成。Oligo dT-Adaptor Primer同時適用于3′-RACE實驗。 |
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| 圖2. RNA PCR的原理 |
| ■ 特點 |
| RNA模板 適用于所有RNA擴增片段大小 ≤5 kb反轉錄酶 AMV Reverse Transcriptase XLDNA Polymerase TaKaRa Ex Taq HSRNase Inhibitor 必須使用 (Kit中含有)合成第一條cDNA鏈的引物 Random 9 mers、Oligo dT-Adaptor Primer或 特異性下游PCR Primer 可供選擇3′-RACE法 RT反應時使用Oligo dT-Adaptor Primer，PCR反應時下游引物使用M13 Primer M4操 作 在同一反應管中進行 (反轉錄酶在進行PCR反應前須進行高溫失活) |
| ■ 反轉錄反應時Primer的選擇 |
| Random 9 mers 適用于長的或具有Hairpin構造的RNA。包括rRNA、mRNA、tRNA等在內的所有RNA的反轉錄反應都可使用本引物。 用Random 9 mers合成的cDNA進行PCR反應時，必須使用特異性引物。Oligo dT-Adaptor Primer 適用于具有Poly(A)+ Tail的RNA。(注意：原核生物的RNA、真核生物 Primer 的rRNA及tRNA以及某些種類的真核生物的mRNA不具有Poly (A)+ Tail)。 本Primer設計巧妙，反轉錄效率高。反轉錄反應后，可用M13 Primer M4進行3′-RACE實驗。特異性下游PCR Primer(PCR時的下游引物) 因其必須與模板序列互補，所以只適用于Target序列已知的情況。 |
| ■ 注意事項 |
| 1. 當同時需要進行數(shù)次反轉錄反應或PCR反應時，應先配制各種試劑的混合液 (Master Mix；其中包括RNase Free dH2O、Buffer、dNTP Mixture、MgCl2等)，然后再分裝到每個反應管中。這樣，可使所取的試劑體積更準確，減少試劑損失，避免重復分取同一試劑。同時也可以減少實驗操作或實驗之間產生的誤差。 2. 使用Reverse Transcriptase、RNase Inhibitor、TaKaRa LA Taq 酶等酶類時，應輕輕混勻，避免起泡；分取之前要小心地離心收集到反應管底部；由于酶保存液粘度高，分取時應慢慢吸取。 3. 酶制品應在實驗前才從-20℃中取出，使用后也應立即放回-20℃中保存。 4. 分裝試劑時務必使用新的槍頭 (Tip)，以防止樣品間污染。 5. 最佳的PCR條件，因PCR擴增儀的不同而不同，所以在使用您的樣品之前最好先試做一下Control反應，以確定最佳的PCR條件。 |
| TaKaRaRNAPCRKit(AMV)Ver.3.0 | |||
| 品牌 | CodeNo. | 產品名稱 | 包裝量 |
| Takara | RR019A | TaKaRaRNAPCRKit(AMV)Ver.3.0 | 100次 |
| Takara | RR019B(A×2) | TaKaRaRNAPCRKit(AMV)Ver.3.0 | 200次 |
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