- 品名： TaKaRa 適用于RNA長片段擴(kuò)增試劑盒（AMV）
- 品牌： TaKaRa
- 型號(hào)： RR012A
- 產(chǎn)品詳情
- 規(guī)格參數(shù)
商品名稱：TaKaRa RNA LA PCR Kit (AMV) Ver.1.1
商品編號(hào)：SPU2021050497
上架時(shí)間：2022-01-04
| ■ 制品內(nèi)容 (100 次量*1) |
| AMV Reverse Transcriptase XL (5 U/μl) (來源于Avian Myeloblastosis Virus)50 μlRNase Inhibitor*2 (40 U/μl)25 μlRandom 9 mers*2 (50 pmol/μl)50 μlOligo dT-Adaptor Primer (2.5 pmol/μl)50 μlRNase Free dH2O1 mlTaKaRa LA Taq (5 U/μl)25 μlM13 Primer M4*2 (20 pmol/μl)50 μl10X RNA PCR Buffer120 μl 100 mM Tris-HCl (pH8.3) 500 mM KCl 10X LA PCR Buffer II (Mg2+ Free)500 μldNTP Mixture (各10 mM)150 μlMgCl2 (25 mM)1 mlControl F-1 Primer*2 (20 pmol/μl) (Positive Control RNA下游引物)25 μlControl R-1 Primer*2 (20 pmol/μl) (Positive Control RNA上游引物)25 μlPositive Control RNA*2 (2 × 105 copies/μl)(Transcribed poly(A)+ RNA of pSPTet3 plasmid)25 μl *1：本試劑盒可用于100次反應(yīng) (總反應(yīng)量：RT 反應(yīng)10 μl, PCR反應(yīng) 50 μl)*2：【各種引物序列】 |
| 引物名稱各引物序列Random 9 mers 5′-NNNNNNNNN-3′Oligo dT-Adaptor Primer 包含dT區(qū)域及M13 Primer M4序列。Control F-1 Primer 5′-CTGCTCGCTTCGCTACTTGGA-3′Control R-1 Primer 5′-CGGCACCTGTCCTACGAGTTG-3′M13 Primer M4 5′-GTTTTCCCAGTCACGAC-3′ |
| *3：【Positive Control RNA】 |
| 本試劑盒中的Control RNA是以pSPTet3質(zhì)粒 (質(zhì)粒中的SP6啟動(dòng)子下游插入長約1.4 kbp的pBR322來源的DNA片段，其DNA片段上含有抗四環(huán)素基因) 為模板由SP6 RNA聚合酶經(jīng)體外轉(zhuǎn)錄而得到的。Control RNA (約1.4 kb) 是帶有30個(gè)A堿基的具有Poly(A)+ 尾的RNA。當(dāng)把Control RNA經(jīng)RT-PCR合成的雙鏈cDNA插入質(zhì)粒時(shí)，該質(zhì)粒便可獲得四環(huán)素抗性。Control RNA簡圖見圖1。 |
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| 圖1. Positive Control RNA：使用各種引物所能擴(kuò)增的DNA片段 |
| ■ 制品說明 |
| TaKaRa RNA LA PCR Kit (AMV) Ver.1.1使用TaKaRa LA Taq酶，實(shí)現(xiàn)反轉(zhuǎn)錄后的更長更準(zhǔn)確的PCR反應(yīng)。TaKaRa LA Taq酶是Takara Bio公司研制的LA (long and accurate) PCR*反應(yīng)的關(guān)鍵組成。本試劑盒利用LA Technology的優(yōu)勢特點(diǎn)，用AMV (Avian Myeloblastosis Virus) 來源的反轉(zhuǎn)錄酶，由RNA反轉(zhuǎn)錄至cDNA，然后再在同一反應(yīng)管中用TaKaRa LA Taq擴(kuò)增此cDNA，操作簡單，使用方便。本試劑盒中的Oligo dT-Adaptor Primer的特別設(shè)計(jì)，使從Poly (A)+ RNA 3’端合成cDNA的效率更高，從而可以利用3’-RACE法高效擴(kuò)增RNA的3′端未知區(qū)域。*：U.S.Patent 5,436,149 for LA Technology is owned by TAKARA BIO INC. |
| ■ 保存 |
| -20℃。 |
| ■ 特點(diǎn) |
| RNA模板 適用于所有RNA擴(kuò)增片段大小 ～12 kb反轉(zhuǎn)錄酶 AMV Reverse Transcriptase (反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)溫度在42℃～60℃)DNA Polymerase TaKaRa LA TaqRNase Inhibitor 試劑盒中含有合成cDNA第一條鏈的引物 Random 9 mers或Oligo dT-Adaptor Primer或特異性下游PCR Primer 可供選擇3′-RACE法 RT反應(yīng)時(shí)使用Oligo dT-Adaptor Primer PCR反應(yīng)時(shí)下游引物使用M13 Primer M4操 作 在同一反應(yīng)管中進(jìn)行 (反轉(zhuǎn)錄酶在進(jìn)行PCR反應(yīng)前須進(jìn)行高溫失活) |
| ■ 使用注意 |
| 1. 當(dāng)同時(shí)需要進(jìn)行多個(gè)反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)或PCR反應(yīng)時(shí)，應(yīng)先配制各種試劑的混合液 (其中包括RNase Free dH2O、Buffer、dNTP Mixture、MgCl2等），然后再分裝到每個(gè)反應(yīng)管中。這樣，可使所取的試劑體積更準(zhǔn)確，減少試劑損失，避免重復(fù)分取同一試劑。同時(shí)也可以減少實(shí)驗(yàn)操作或?qū)嶒?yàn)之間產(chǎn)生的誤差。 2. 使用Reverse Transcriptase (AMV)、RNase Inhibitor、TaKaRa LA Taq 等試劑時(shí)，應(yīng)輕輕混勻，避免起泡；分取之前要小心地離心收集到反應(yīng)管底部；由于酶保存液中含有50%的甘油，粘度高，分取時(shí)應(yīng)慢慢吸取。 3. 酶制品應(yīng)在實(shí)驗(yàn)前才從-20℃中取出，使用后也應(yīng)立即放回-20℃中保存。 4. 分裝試劑時(shí)務(wù)必使用新的槍頭，以防止樣品間污染。 5. PCR反應(yīng)條件 最適的PCR條件因PCR擴(kuò)增儀的不同而不同，建議在進(jìn)行樣品實(shí)驗(yàn)前先試做一下Control實(shí)驗(yàn)。 6. 引物選擇 用于反轉(zhuǎn)錄的引物可視實(shí)驗(yàn)具體情況選擇Random 9 mers、Oligo dT-Adaptor Primer或特異性下游引物。對于不具有Hairpin構(gòu)造的短鏈mRNA，3種引物中的任何一種都可以使用，但一般應(yīng)按以下方法進(jìn)行選擇。 |
| Random 9 mers 適用于長的或具有Hairpin構(gòu)造的RNA。包括rRNA、mRNA、tRNA等在內(nèi)的所有RNA的反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)都可使用本引物。 用Random 9 mers合成的cDNA進(jìn)行PCR反應(yīng)時(shí)，使用任何一對特異性引物都能獲得良好的擴(kuò)增。Oligo dT-AdaptorPrimer 適用于具有Poly(A)+ Tail的RNA。(注意：原核生物的RNA、真核生物Primer 的rRNA及tRNA以及某些種類的真核生物的mRNA不具有Poly(A)+ Tail)。本Primer設(shè)計(jì)巧妙，反轉(zhuǎn)錄效率高。反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)后，可用M13 Primer M4進(jìn)行3’-RACE實(shí)驗(yàn)。特異性下游PCR Primer(PCR時(shí)的下游引物) 因其必須與模板序列互補(bǔ)，所以只適用于Target序列已知的情況。 |
| TaKaRaRNALAPCR?Kit(AMV)Ver.1.1 | |||
| 品牌 | CodeNo. | 產(chǎn)品名稱 | 包裝量 |
| Takara | RR012A | TaKaRaRNALAPCR?Kit(AMV)Ver.1.1 | 100次 |
暫無內(nèi)容...
